中藥注射劑**檢查法應用指導原則 （2005年版一部）
附錄 XⅧ B 中藥注射劑**檢查法應用指導原則
本指導原則為中藥注射劑臨床使用的**性和制劑質量可控性而定。包括異常毒性檢查法、降壓物質檢查法、過敏反應檢查法、溶血與凝聚檢查法、熱原檢查法、**內**檢查法。中藥注射劑可參照本指導原則進行檢查項目的適用性研究。
檢查限值
檢查限值可按以下各項目內容要求進行研究。研究確定限值后，應進行三批以上供試品的檢查驗證。
1、異常毒性檢查
（1）制定本檢查項限值前，須先求得中藥注射劑單次給藥的半數致死量（LD50）和*低致死量（LD5），并了解其毒性反應癥狀。給藥途徑通常為靜脈注射，也可根據臨床用藥情況選擇其他途徑，當一個注射劑有幾種給**式，如皮下注射、肌內注射、靜脈推注及靜脈滴注時，至少應做靜脈給藥的LD50。
觀察時間為72小時或更長時間。
（2）中藥注射劑異常毒性檢查的劑量限值應低于該注射劑的正常毒性劑量（*低致死量），并應高于人臨床劑量，同時應考慮到實驗室之間的差異、動物反應性的差異和制劑的差異。應根據正常毒性劑量變動范圍確定異常毒性檢查劑量的限值。
大劑量中藥注射劑靜脈注射，按常規速度（0.05~0.1ml/s），每只小鼠0.8ml，20只小鼠仍末見死亡或毒性反應，可以該*大給藥劑*作為異常毒性檢查的劑量限值。
中藥注射劑異常毒性檢查的觀察時間一般為48小時，以死亡為觀察指標，并記錄觀察期毒性反應情況。
2、降壓物質檢查
（1）確定供試品對麻醉貓能否引起血壓下降及降壓值與劑量間的關性。
（2）凡有可能產生類組胺樣急性***反應的靜脈注射劑均應進行降壓物質檢查。
（3）小劑量注射液一般根據臨床用藥劑量或不低于臨床用量來估算供試品的劑量限值。
（4）大劑量注射劑如果按靜脈注射原液2ml/kg劑量未見降壓反應，該劑量可以作為給藥限值。
3、過敏反應檢查
（1）觀測供試品對豚鼠腹腔注射（或皮下注射）和靜脈給藥急性毒性反應。
（2）根據豚鼠毒性反應劑量和臨床使用劑量確定豚鼠致敏劑量和攻擊劑量。除特殊情況外（如刺激性較大），一般致敏以腹腔注射為主，攻擊以靜脈注射為主。攻擊劑量應大于致敏劑量，但兩種劑量均應小于急性毒性*小反應劑量。
（3）預試驗應取至少9只豚鼠，分3組，三次致敏后，在**致敏日后14日、21日、28日進行攻擊或抗體滴度試驗，以確定攻擊*佳反應時間。
（4）必要時，預試驗采用半成品進行致敏和攻擊研究，以確定該注射劑成分和工藝有無致敏的可能性。如半成品或工藝過程無致敏性，可考慮不進行過敏反應檢查。
4、溶血與凝聚檢查
觀察供試品原液和稀釋液有無溶血和凝集反應，按溶血和凝聚檢查法進行試驗，試驗研究應同時設供試品管、陽性對照管、陰性對照管、供試品陰性對照管。如有陽性反應，應測定無反應的量小稀釋度，結合該藥品臨床用法用量，以確定檢查稀釋限值。
5、熱原檢查
（1）家兔熱原檢查劑量應為人用每公斤體重每小時*大供試品劑量的1～3倍。
（2）供試品若非等滲或過敏過堿，應進行調整。
（3）熱原檢查劑量不應使家兔體溫下降或產生毒性反應，由此而干擾熱原檢查時，應采取緩慢注射等措施，如仍不能消除干擾，應盡可能采用**內**檢查法。
6、**內**檢查
（1）中藥注射劑內**限值，按**內**檢查法（附錄ⅩⅢ D）要求確定，由于工藝、成分復雜，可變因素多等原因，計算限值時應根據生產和臨床用藥情況做必要調整，適當提高限值要求。
（2）由于中藥性注射劑干擾因素多，在方法學研究中應盡可能使用國內不同廠生產的鱟試劑和不同批號的供試品（3批以上）進行干擾試驗。如發現差異較大或干擾試驗變化較大，應考慮采用熱原檢查法。
異常毒性檢查法
本法系將一定量的供試品溶液注入小鼠體內或口服給藥，在規定的時間內觀察小鼠出現的死亡情況，以判定供試品是否符合規定的一種方法。
供試驗用的小鼠應健康合格，體重17~20g，在試驗前及試驗的觀察期內，均應按正常飼養條件飼養。作過本試驗的小鼠不得重復使用。
供試品溶液的配制 除另有規定外，用氯化鈉注射液按各品種項下規定的濃度制成供試品溶液。
檢查法 除另有規定外，取上述小鼠5只，按各品種項下規定的給藥途徑，每只小鼠分別給予供試品溶液0.5ml。給藥途徑分為以下幾種。
靜脈注射 將供試品溶液注入小鼠尾靜脈，應在4~5秒勻速注射完畢，規定緩慢注射的品種可延長至30秒。
腹腔注射 將供試品溶液注入小鼠腹腔。
皮下注射 將供試品溶液注入小鼠腹部或背部兩側皮下。
口服給藥 將供試品溶液通過適宜的導管，灌入小鼠胃中。
結果判斷 除另有規定外，全部小鼠在給藥后48小時內不得有死亡時，應另取體重18～19g的小鼠10只復試，全部小鼠在48小時內不得有死亡。
降壓物質檢查法
本法系比較組胺對照品（S）與供試品（T）引起麻醉貓血壓下降的程度，以判定供試品中所含降壓物質的限度是否符合規定。
對照品溶液的配制 精密稱取磷酸組胺對照品適量，按組胺計算，加水溶解使成每1ml中含1.0mg的溶液，分裝于適宜的容器內，4~8℃貯存，如無沉淀析出，可在3個月內使用。
對照品稀釋液的配制 臨用前，精密量取組胺對照品溶液適量，用氯化鈉注射液配成每1ml中含組胺0.5μg的溶液。
供試品溶液的配制 按品種項下規定的劑量，配成適當濃度的供試品溶液。試驗時，一般要求供試品溶液與對照品稀釋液的注入體積應相等。
檢查法
取健康合格、體重2kg以上的貓，雌者無孕，用適宜的麻醉劑（如***類）麻醉后，固定于保溫手術臺上，分離氣管并插入插管以使呼吸暢通，必要時可進行人工呼吸。在一側頸動脈插入連接測壓計的動脈套管，管內充滿適宜的抗凝劑溶液，以記錄血壓，也可其他適當儀器記錄血壓。在一側股靜脈內插入靜脈插管，供注射藥液用。試驗中應注意保持動物體溫。全部手術完畢后，將測壓計調節到與動物血壓相當的高度（一般為13.3~16.0kPa），開啟動脈夾，待血壓穩定后，方可進行藥液注射。各次注射速度應相同，每次注射后立即注入一定量的氯化鈉注射液，相鄰兩次注射的間隔時間一致（3~5分鐘），每次注射應在前一次反應恢復穩定以后進行。
自靜脈依次注入上述對照品稀釋液，劑量按動物體重每1kg注射組胺0.05μg、0.1μg及0.15μg，重復2~3次，如0.1μg劑量應致的血壓下降值均不小于2.67kPa，同時相應各劑量所致反應的平均值有差別，可認為該動物靈敏度符合規定。
取對照品稀釋液按動物體重每1kg注射組胺0.1μg的劑量（ds），供試品溶液按品種項下規定的劑量（dT），照下列次序注射一組4個劑量：ds、dT、dT、ds。然后以**與第三、**與第四劑量所致的反應分別比次，如dT所致的反應值均不大于ds所致反應值的一半，即認為供試品的降壓物質檢查符合規定。否則應按上述次序繼續注射一組4個劑量，并按相同方法分別比較兩組內各對ds、dT劑量所致的反應值，仍認為供試品的降壓物質檢查符合規定，如dT所致的反應值均大于ds所致的反應值，即認為供試品的降壓物質檢查不符合規定，否則應另取動物復試。如復試的結果仍有dT所致的反應值大于ds所致的反應值，即認為供試品的降壓物質檢查不符合規定。
所用動物經靈敏度檢查如仍符合規定，可繼續用于降壓物質檢查。
過敏反應檢查法
本法系將一定量的供試品溶液注入豚鼠體內，間隔一定時間后靜脈注射供試品進行攻擊，觀察動物出現過敏反應的情況，以判定供試品是否引起動物全身過敏反應。
供試驗用豚鼠應健康合格，體重250~350g，雌鼠應無孕。在試驗前和試驗過程中，均應按正常飼養條件飼養。做過本試驗的豚鼠不得重復使用。
供試品溶液的配制 除另有規定外，均按各品種項下規定的濃度配制成供試品溶液。
檢查法 除另有規定外，取上述豚鼠6只，隔日每只每次腹腔注射供試品0.5ml，共3次，進行致敏。然后將其均分為2組，每組3只，分別在**注射后第14日和第21日，由靜脈注射供試品1ml進行攻擊。每日觀察每只動物的行為和體征，**致敏和攻擊前測定和記錄每只動物的體重。觀察攻擊后30分鐘內，動物有無豎毛，呼吸困難，抽搐等過敏反應癥狀。
結果判斷 靜脈注射供試品后30分鐘后，不得出現過敏反應。如有豎毛，噴嚏，干嘔，連續咳嗽3聲和呼吸困難等現象中的2種或2種以上，或出現抽搐，休克，死亡現象之一者，判供試品不符合規定。
溶血與凝聚檢查法
本法系將一定量供試品與2%的兔（或羊）紅細胞混懸液混合，溫育一定時間后，觀察其對紅細胞狀態是否產生影響的一種方法。
2%紅細胞混懸液的制備 取兔或羊血數毫升（約20ml），放入含玻璃珠的錐形瓶中振搖10分鐘，或用玻璃棒攪動血液，除去纖維蛋白原，使成脫纖血液。加入0.9%氯化鈉溶液約10倍量，搖勻，每分鐘1000~1500轉離心15分鐘，除去上清液，沉淀的紅細胞再用0.9%氯化鈉溶液按上述方法洗滌2~3次，至上清液不顯紅色為止。將所得紅細胞用0.9%氯化鈉溶液配成2%的混懸液，供試驗用。
供試品溶液的制備 除另有規定外，臨床用于非血管內給藥的注射劑，以各藥品使用說明書規定的臨床使用濃度，用0.9%氯化鈉溶液1：3稀釋后作為供試品溶液；用于血管內給藥的注射劑以各藥品使用說明書規定的臨床使用濃度作為供試品溶液。
檢查法 取潔凈試管5只，編號，1、2號管為供試品管，3號管為陰性對照管，4號管為陽性對照管，5號管為供試品對照管。按下表所示依次加入2%紅細胞混懸液、0.9%氯化鈉溶液或蒸餾水，混勻后，立即置37℃±0.5℃的恒溫箱中進行溫育。3小時后觀察溶血和凝聚反應。
試管編號 1、2 3 4 5
2%紅細胞混懸液/ml 2.5 2.5 2.5
0.9%氯化鈉溶液/ml 2.2 2.5 4.7
蒸餾水/ml 2.5
供試品溶液/ml 0.3 0.3
如試驗中的溶液呈澄明紅色，管底無細胞殘留或有少量紅細胞殘留，表明有溶血發生，如紅細胞全部下沉，上清液無色澄明，或上清液雖有色澄明，但1號管和5號管比色無顯著差異，則表明無溶血發生。
若溶液中有棕紅色或紅棕色絮狀沉淀，振搖后不分散，表明有紅細胞凝發生。如有紅細胞凝聚的現象，可按下法進一步判定是凝聚還是假凝聚。若凝聚物在試管振蕩后又能均勻分散，或將凝聚物置于載玻片上，在蓋玻片邊緣滴加2滴0.9%氯化鈉溶液，置顯微鏡下觀察，凝聚紅細胞能被沖散者為假凝聚，若凝聚物不被搖散或玻片上不被沖散者為凝聚。
結果判斷 當陰性對照管無溶血和凝聚發生，陽性對照管有溶血發生時，若供試品管中的溶液在3小時內不發生溶血和凝聚，判供試品符合規定，若供試品管中的溶液在3小時內發生溶血和（或）凝聚，判供試品不符合規定。
熱原檢查法
見熱原檢查法（附錄ⅩⅢ A）。
**內**檢查法
見**內**檢查法（附錄ⅩⅢ D）。
